EF21A\J1 2016-01版
孔雀石綠
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物孔雀石綠的含量。
二、試劑盒特性
水樣 ······································· 0.1ppb
水產品 ······································· 0.5ppb
顯性孔雀石綠 ································· 100%
隱性孔雀石綠 ································ 0.1%
結 晶 紫 ···································· 95%
隱性結晶紫 ·································· 0.1%
水樣、水產品 ···························· 80%~110%
板內、板間變異系數≤12%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 10倍濃縮標準液×6瓶 （1ml/瓶、黑色帽） | 0ppb | 0.5ppb |
1.5ppb | 4.5ppb | ||
13.5ppb | 40.5ppb | ||
3 | 酶標記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 氧化劑 | 3ml | 白色帽 |
10 | 4X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：乙腈、二氯甲烷、無水硫酸鈉、正己烷
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
配液1 樣品提取液
乙腈-二氯甲烷混合溶液：
V乙腈-V二氯甲烷 = 4 : 1， 取40ml乙腈，
再加入10ml二氯甲烷，混勻后使用。
配液2 樣品復溶液
將4X濃縮復溶液用去離子水按1：3稀釋
（1份4×濃縮復溶液+3份去離子水），或按所
需用量配制。
取50µl清澈水樣樣直接測定（如果水樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清澈樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。
樣本稀釋倍數: 1倍
樣本稀釋倍數: 1倍
注：此方法所得到的結果為孔雀石綠；隱性孔雀石綠；結晶紫；隱性結晶紫的總量。
六、 酶標免疫分析程序:
配液2：
配制孔雀石綠標準液：取一定量的10倍濃縮
標準液用樣品復溶液10倍稀釋，現配現用，
具體如下：
標準液6：配制4.05ppb標準液--取50ul 40.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液5：配制1.35ppb標準液--取50ul 13.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液4：配制0.45ppb標準液--取50ul 4.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液3：配制0.15ppb標準液--取50ul 1.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液2：配制0.05ppb標準液--取50ul 0.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液1：配制 0ppb標準液--取50ul 0ppb標
準液加450ul樣品復溶液混勻；
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含孔雀石綠量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；
0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中孔雀石綠實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以孔雀石綠標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中孔雀石綠實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
