氨芐青霉素
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物氨芐青霉素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗氨芐青霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氨芐青霉素的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物氨芐青霉素的含量。
二、試劑盒特性
組織 ················································ 2ppb
氨芐青霉素· ········································ 100%
氨芐氨芐青霉素········································ 0.8%
鄰氯氨芐青霉素 ······································· 0.2%
雙氯氨芐青霉素 ······································· 0.1%
阿莫西林 ········································· 0.1%
頭孢塞呋 ········································· 0.1%
組織 ········································· 60%-120%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 10X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：氫氧化鈉、濃鹽酸
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
配液 1 0.2M 鹽酸
取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L
配液 2 1 M 氫氧化鈉
稱 4g 氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ml
配液 3 樣本稀釋液
將10X濃縮復溶液與去離子水 1:9 稀釋后用
1、稱 1±0.05g 均質后的組織至50ml離心管中，加入2ml 0.2M鹽酸（見配液1），充分振蕩3min；
2、再加入400µl 1M 氫氧化鈉（見配液2）溶液和1.6ml樣本稀釋液（見配液3）溶液，充分振蕩3min，室溫4000r/min 以上離心 5min；
3、取上清液，用樣本稀釋液按1：2（50µl樣本液加100µl樣本稀釋液）稀釋，混合30s；取50 µl用于分析。
樣本稀釋倍數：15
六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氨芐青霉素量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氨芐青霉素實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以氨芐青霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氨芐青霉素實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
