EF46A\K4 2018-01版
黃曲霉毒素總量
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物黃曲霉毒素總量將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗黃曲霉毒素總量抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素總量的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物黃曲霉毒素總量的含量。
二、試劑盒特性
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油··········· 2 ppb
黃曲霉毒素B1 ··································· 100%
黃曲霉毒素M1 ····································· 91.2%
黃曲霉毒素B2 ····································· 68.4%
黃曲霉毒素G1 ······································· 4.7%
黃曲霉毒素G2 ······································· 2.7%
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油 ······· 95±35%
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.02ppb |
0.06ppb | 0.18ppb | ||
0.54ppb | 1.62ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱、打印機
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：甲醇、正己烷
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
配液1 樣本復溶液：
用去離子水將20×濃縮復溶液按1：19稀
釋（1份20×濃縮復溶液+19份去離子水）。
配液2 樣本提取液：
將甲醇與去離子水按7:3比例混合均勻（7份甲醇+3份去離子水）。
（a）組織、飼料、大米、玉米樣本處理方法：
樣本稀釋倍數：40倍
（b）食用油樣本處理方法：
樣本稀釋倍數：40倍
（c）花生樣本處理方法：
中；加入5ml樣本提取液，再加入4ml正己
烷，充分振蕩3min，20℃ 4000r/min以上離
心10min；
樣本復溶液，充分振蕩混勻；
3. 取50µl用于分析
樣本稀釋倍數：25倍
六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素總量量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.02pb為1.816；0.06ppb為1.415；0.18ppb為0.74；0.54ppb為0.313；1.62ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb～1.62ppb；樣本2的濃度范圍是0.06ppb～0.18ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中黃曲霉毒素總量實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以黃曲霉毒素總量標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中黃曲霉毒素總量實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
農業部生物毒素檢測重點實室 | 聯合研制 |
|
