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樣品去鹽技術(shù)
在免疫酶技術(shù)中，抗原、抗體、酶及酶標(biāo)記抗體（或抗原）在分離與純化過(guò)程中，常常會(huì)碰到去鹽這一實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。經(jīng)過(guò)去鹽，蛋白質(zhì)溶液中不必要的無(wú)機(jī)鹽分子得以去除，從而使蛋白進(jìn)一步純化與穩(wěn)定。常用的去鹽技術(shù)如下：
1．透析
適用于體積不太大的蛋白質(zhì)溶液，簡(jiǎn)單方便，效果理想但費(fèi)時(shí)。
2.凝膠過(guò)濾
適用于體積中等的蛋白質(zhì)溶液，簡(jiǎn)便快速，效果理想，但去鹽后的蛋白質(zhì)溶液體積增大較多。
3.超濾
適用于體積較大的蛋白質(zhì)溶液，去鹽速度快，同時(shí)具有濃縮作用，但由于膜吸附作用，樣品丟失較多。
4.透析
實(shí)驗(yàn)室常用的去鹽方法是透析法。
在透析法中所使用的透析袋，是一種斗透膜。半透膜具有使小分子或離子透過(guò)，而蛋白質(zhì)分子不能通過(guò)的特性。將蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi)，浸泡于蒸餾水中，由于膜內(nèi)外可擴(kuò)散離子濃度的差別，使蛋白質(zhì)溶液中的無(wú)機(jī)鹽分子向膜外蒸餾水中擴(kuò)散。如果經(jīng)常更換蒸餾水，則可將蛋白質(zhì)溶液中的鹽類分子全部除去，這就是半透膜的去鹽透析原理。假若膜外不是蒸餾水而是緩沖液，可以經(jīng)過(guò)膜內(nèi)外離子的相互擴(kuò)散，改變蛋白質(zhì)溶液的無(wú)機(jī)鹽成分，這就是半透膜的平衡透析原理。在離子交換層析前經(jīng)常進(jìn)行平衡透析處理。
半透膜透析去鹽過(guò)程如下：
5．討論
（1）蛋白質(zhì)樣品的濃度應(yīng)透析后測(cè)定，因?yàn)榻?jīng)過(guò)半透膜透析，膜內(nèi)滲透壓高于膜外，水分子會(huì)進(jìn)入膜內(nèi)，所以在去鹽以后，蛋白質(zhì)溶液體積會(huì)相應(yīng)增大。
（2）有時(shí)會(huì)在透析袋內(nèi)發(fā)生沉淀，一般而言，通過(guò)離心去除并不影響蛋白質(zhì)樣品的性質(zhì)。
（3）透析袋在生理鹽水中浸洗后，還可繼續(xù)使用。
