業(yè)執(zhí)照.jpg)
質(zhì)粒小量快速提取試劑盒
Rapid Mini Plasmid Kit
試劑盒組成
| 保存 | YDP101-01 100 次 | YDP101-02 200 次 |
平衡液BL |
室溫 |
60ml |
120ml |
RNaseA（10mg/ml） | 室溫 | 300µl | 300µl×2 |
溶液 P1 | 4℃ | 30ml | 30ml×2 |
溶液 P2 | 室溫 | 30ml | 30ml×2 |
溶液 P3 | 室溫 | 40ml | 40ml×2 |
漂洗液WB |
室溫 | 25ml 25ml×2 第--次使用前按說明加 指+*定量乙醇 | |
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 15ml | 10ml×2 |
吸附柱AC | 室溫 | 100 個(gè) | 200 個(gè) |
收集管（2ml） | 室溫 | 100 個(gè) | 200 個(gè) |
保存條件：本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 18 個(gè)月不影響使用效果。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒采用改進(jìn) SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高
鹽、低pH 值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒 DNA，再通過漂洗液將雜質(zhì)和
其它細(xì)菌成分去除，后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒 DNA 從硅
基質(zhì)膜上洗脫。
1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極
小，可重復(fù)性好?？朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使
用水洗脫， 但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒
應(yīng)該保存在-20℃。質(zhì)粒DNA 如果需要長(zhǎng)期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫
（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，
使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑：無水乙醇
操作步驟：
ð 第--次使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入指+#定量無水乙醇，充分混勻，加入
后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻，每次使用后置于 2-8℃保存。
ð 將溶液 P3 放在冰上預(yù)冷，可以提高產(chǎn)量。
1. 向吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）加 500μl 的平衡液 BL，12,000pm 離心
1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
2. 取 1.5-4.5ml 過夜培養(yǎng)的菌液 12,000rpm 離心 30 sec，盡可能的倒干上清，收集
菌體。
3. 用 250μl 溶液 P1 重懸菌體沉淀，渦旋振蕩至*懸浮。
4. 加 250μl 的溶液 P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次使菌體充分裂解。
5. 加 350μl 溶液 P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4-7 次，充分混勻時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀，
12,000rpm 離心 5 min，小心取上清。
6. 將上一步所得上清加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心
30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。
7. 加入 500μl 漂洗液 WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心
30 sec，棄掉廢液。
8. 重復(fù)步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放
置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下
游反應(yīng)。10.取出吸附柱 AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，室溫放置 10 min。
11.在吸附膜的中間部位加 50μl-100μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃
水浴中加熱效果更好），室溫放置 2 min，12,000rpm 離心 1 min。如果需要較多量
質(zhì)粒，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心 1 min。洗脫體積越大，洗脫
效率越高。如果需要質(zhì)粒濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是小體積
不應(yīng)少于 30μl，體積過小降低質(zhì)粒洗脫效率，減少質(zhì)粒產(chǎn)量。洗脫液的pH
值對(duì)于洗脫效率有很大影響。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
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