氟苯尼考
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗氟苯尼考抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物氟苯尼考的含量。
二、試劑盒特性
蜂 蜜··············································· 0.1ppb
組 織················································ 5 ppb
牛 奶··············································· 0.2ppb
氟苯尼考· ····································· 100%
甲砜霉素 ········································ < 0.1%
氟苯尼考胺 ······································ 11%
氯霉素 ············································ < 0.1%
組 織、蜂 蜜、牛 奶 ······················ 90%±30%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.1ppb |
0.2ppb | 0.4ppb | ||
0.8ppb | 1.6ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮提取液 | 50ml*2 | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：乙酸乙酯、正己烷、乙腈
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
配液1 樣本提取液：
將20X濃縮提取液用去離子水按1：19稀釋。(1份20X濃縮提取液+19份去離子水)。
配液2 牛奶樣本提取液：
將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻（1份乙腈+2 份乙酸乙酯）。
（a）組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法
樣本稀釋倍數: 50倍
注：如需檢測范圍包含100ppb，可在上述步驟1離心后取出100µl上層液體加入900µl樣本提取液（配液1），混合均勻；取50µl用于分析。
此時，樣本稀釋倍數為：100倍
（b）蜂蜜處理方法
樣本稀釋倍數： 1倍
（c）牛奶樣本處理方法
牛奶樣本提取液（配液2）振蕩1min，室溫
4000r/min以上離心10min；
2、 取出1ml上層液體在50-60℃氮氣流中吹干；
3、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml
樣本提取液（配液1）混合30s，室溫4000r/min
以上離心5min；去除上層有機相；
4、 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數: 2倍
六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.2ppb為1.415；0.4ppb為0.74；0.8ppb為0.313；1.6ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.8ppb～1.6ppb；樣本2的濃度范圍是0.2ppb～0.4ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以氟苯尼考標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氟苯尼考實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
實驗代做服務：
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