堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性檢測試劑盒說明書
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存，變成藍綠色不能使用。
標準品：液體 1mL×1 支，2μmol/mL 酚標準液，4℃保存。
AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。
AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。
在堿性環境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計算 AKP 活性。試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。
一、粗酶液提取：
稱取約 0.1g 組織，加提取液 1mL 充分研磨，4℃、10000rpm 離心 10min，取上清液待測。血液可直接用于測定，或者適當稀釋后用于測定。
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min 以上。
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標準管 |
蒸餾水 | - | - | 4 | - |
2μmol/mL 標準品 | - | - | - | 4 |
上清液 | 4 | - | - | - |
試劑一 | 40 | 40 | 40 | 40 |
試劑二 | 40 | 40 | 40 | 40 |
混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min | ||||
試劑三 | 120 | 120 | 120 | 120 |
上清液 | - | 4 | - | - |
混勻后于 510 nm 測定吸光度，分別記為 A 測定管、A 對照管、A 空白管、A 標準管。 | ||||
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1. 按蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。
AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T
=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr
2. 按樣本鮮重計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。
AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W
3. 按液體體積計算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 酚為一個酶活力單位。
AKP/ALP (U/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T
=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)
C 標準品：2μmol/mL；V 反總：反應體系總體積（mL），204μL=0.204mL； V 樣：加入反應體系中上清液體積（mL），0.004mL；T：反應時間（min），15 min；V 提取：加入提取液體積，1mL； W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。
2、 試劑三變藍綠色后不能再使用。
3、 加入試劑三后必須立即混勻，否則顯色不*。
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