2×GC-rich PCR MasterMix（無染料）說明書
貨號：K0658
保存條件：-20℃長期保存。如需頻繁使用，可存放于2-8℃，盡量避免反復凍融。
組分說明
Cat. No. K0658
Kit Size 1 ml
2×GC-rich PCR MasterMix（無染料） 1 ml
RNase-Free Water 1 ml
注意：2×GC-rich PCR MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,
2×Es Taq PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400 µM dNTP mix。
產品簡介
本品是由Es Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR穩定劑
和增強劑組成的預混體系，濃度為 2×。預配好的PCR混合液使操作更加2+ 簡單快捷，可最大限度地減少人為誤差和污染。經過優化的緩沖液配方使酶的作用發揮最大功效，實現對復雜模板的高保真、高效率擴增，d創的MasterMix配方使整個反應體系非常穩定，重復性好。本品不含染料， PCR程序結束后可根據需要加入適量上樣緩沖液后進行電泳操作。擴增得到的PCR產物3′端附有一個“A"堿基，因此可直接用于T/A克隆。主要適用于對保真性要求較高的PCR反應和結構復雜的模板如GC含量高，有二級結構等的擴增，對簡單模板有效擴增的片段可達20 kb，對復雜模板可達10 kb。
質量控制
經檢驗無外源核酸酶活性； PCR方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地擴增多種基
因組中的單拷貝基因；2-8℃存放三個月，活性無明顯改變。
本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
使用方法
以下舉例為常規PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的
片段大小不同進行相應的改進和優化。
1. PCR反應體系
試劑 50 μl反應體系 終濃度
2×GC-rich PCR MasterMix 25 μl 1×
Forward Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Template DNA 2 μl <1 μg/reaction
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。
2. PCR反應條件
步驟 溫度 時間
預變性 94℃ 2 min
變性 94℃ 30 s
退火 55-65℃ 30 s 25-35個循環
延伸 72℃ 30 s
終延伸 72℃ 2 min
注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。
2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Es Taq DNA Polymerase的擴增效率為1 kb/30 s。
3）可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。
3.結果檢測：本產品不含染料，反應結束后取5 µl反應產物加入適量上樣緩沖液后進行電泳檢測結果。
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