MSF 小鼠皮膚成纖維細胞 Catalogue No.: C1553 Product Format: a T25 flask Culture Properties：貼壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY. Components Item | Specifications | a T25 flask | 2X106 | Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture - 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；
- 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。） - 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
- 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。 Cell cryopreservation 1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇） 2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。 Tips： - 細胞經(jīng)過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞的死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
- 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
- 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài)，選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞*漂浮。 |
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