非標定量（Label-free）實驗
非標定量(Label-free)
非標定量(Label-fiee) :是一種非標記的差異蛋白質組學技術,不需要使用同位素標記物標記肽段，直接根據(jù)質譜峰的信號強度來對肽段或蛋白進行相對定量。Label-free通過HPLC分級液質聯(lián)用對酶解肽段進行分析. 現(xiàn)在基于質譜的非標定量技術主要有兩種: 一是根據(jù)一級質譜相關的肽段峰強度以及峰面積等信息進行蛋白定量，二是根據(jù)蛋白對應肽段的二級質譜總數(shù)(spectral counts)進行定量。
實驗步驟
1.蛋白前期處理，包括去除核酸，蛋白純化定量，SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳;
2.蛋白質膠內酶切;
3.多肽純化; .
4.多肽混合物的質譜分析，包括質譜鑒定和定量信息比較;
5.生信分析
結果展示
實驗周期及交付標準
1.實驗周期: 4-6周
2.交付標準:蛋白定量結果、鑒定結果、質譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結果(G0分析. KEGG分析等等)
需確認的信息
1.樣本的種屬
2.樣本的類型(組織or細胞or血液)
3.樣本的數(shù)量及分組
4.分析要求
參考文獻
[1]HuS, Qiu N, Liu Y , et al. Identification and comparative proteomic study of quail and duck egg white protein using 2-dimensional gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometryanalysis[J]. Poultry Science, 2016:pew033.
[2] Bouvet M , Turkieh A，Acosta-Martin A E , et al. Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis[J]. Journal
of Visualized Experiments, 2014(93).
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